惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌。有些菌株為卵圓形，單端叢毛菌，運(yùn)動(dòng)活潑。惡臭假單胞為專性需氧菌，廣泛存在于土壤和水中。
在GB 8538-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》銅綠假單胞檢測項(xiàng)目中，要求定期使用惡臭假單胞菌作為陰性對(duì)照菌對(duì)整個(gè)檢驗(yàn)過程進(jìn)行質(zhì)量控制。
今天我們就通過實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹一下惡臭假單胞的菌株活化及生化特性等。
一、惡臭假單胞菌菌株活化
菌株活化一定要選擇合適的培養(yǎng)條件才能夠保證微生物的生長?！恫芗?xì)菌鑒定手冊》中表明惡臭假單胞菌最適生長溫度為25℃-30℃。ATCC（美國菌種保藏中心）給出的菌株活化說明中，培養(yǎng)溫度為30℃；CICC（中國工業(yè)微生物菌種保藏中心）菌種說明中要求培養(yǎng)溫度為28℃。
我們將菌株接種到營養(yǎng)瓊脂平板和BHI（腦心浸液培養(yǎng)基）中分別置于36℃和28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，惡臭假單胞菌在36℃也可以生長，但比28℃生長弱一些。所以在菌株活化時(shí)，為保證菌株良好生長建議25℃-30℃進(jìn)行培養(yǎng)。
二、惡臭假單胞菌的生物學(xué)特性
在GB 8538-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》銅綠假單胞檢測項(xiàng)目中，惡臭假單胞菌為陰性對(duì)照菌，銅綠假單胞菌為陽性對(duì)照菌。那么惡臭假單胞菌生物學(xué)特性是什么？與銅綠假單胞菌又有何區(qū)別？我們通過實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象來進(jìn)行了解。
1）假單胞CN瓊脂
將活化好的菌株接種假單胞CN瓊脂，36℃培養(yǎng)24h。平板上銅綠假單胞為藍(lán)綠色菌落，而惡臭假單胞為無色菌落。將平板置于366nm紫外燈下觀察熒光，銅綠假單胞有熒光，惡臭假單胞無明顯熒光。
2）綠膿菌素測試
將菌株接種到綠膿菌素測定培養(yǎng)基上，３６℃±１℃培養(yǎng)２４ｈ±２ｈ，加入三氯甲烷３ｍＬ～５ｍＬ，可搗碎培養(yǎng)基并充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷，待三氯甲烷提取液呈藍(lán)色時(shí)，用吸管將三氯甲烷移到另一試管中，并加入１mol／Ｌ的鹽酸１ｍＬ，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時(shí)為陽性。
銅綠假單胞菌綠膿菌素實(shí)驗(yàn)為陽性，惡臭假單胞菌為陰性。
3）產(chǎn)胺實(shí)驗(yàn)
將菌株接種至乙酰胺液體培養(yǎng)基中，在３６℃±１℃下培養(yǎng)２０ｈ～２４ｈ。然后向每支試管培養(yǎng)物加入１滴～２滴鈉氏試劑，１0ｓ內(nèi)檢查各試管的顏色變化，如表現(xiàn)出從黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽性結(jié)果，否則為陰性。
銅綠假單胞菌產(chǎn)胺實(shí)驗(yàn)為陽性，惡臭假單胞菌為陰性。
4）42℃生長實(shí)驗(yàn)
將菌株接種營養(yǎng)瓊脂平板上或者42℃生長試驗(yàn)生化管中，４２℃±１℃ 培養(yǎng)２４ｈ～４８ｈ，能生長為陽性結(jié)果，否則為陰性。
銅綠假單胞菌42℃生長實(shí)驗(yàn)為陽性，惡臭假單胞為陰性。
5）氧化酶實(shí)驗(yàn)
?。驳巍车涡迈r配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。?將菌株純培養(yǎng)物涂布在預(yù)備好的濾紙上。在１０ｓ內(nèi)顯深藍(lán)紫色的視為陽性反應(yīng)。?
銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌氧化酶實(shí)驗(yàn)均為陽性。
6）金氏B培養(yǎng)基產(chǎn)熒光實(shí)驗(yàn)
將菌株接種于金氏Ｂ培養(yǎng)基３６℃±１℃恒溫箱培養(yǎng)１ｄ～５ｄ。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光，將５ｄ內(nèi)產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽性。
銅綠假單胞菌產(chǎn)生熒光為陽性，惡臭假單胞菌不產(chǎn)熒光為陰性。
綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，銅綠假單胞菌和惡臭假單胞菌在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)以及主要生化反應(yīng)結(jié)果匯總?cè)缦拢?/span>
參考文獻(xiàn)：
1、GB 8538-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》
2、《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》【M】，科學(xué)出版社，布坎南（R.E.Buchanan）等編，1984
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