? ? ? ?感謝各位老師參與11月17日的陸橋公益直播課《2022版國(guó)標(biāo)食品中葉酸和維生素B12微孔板法測(cè)定解析》，如您未能及時(shí)聆聽，我們已設(shè)置回放，有效期一周（至2022年11月27日） 。
? ? ? ?期待您再次參與陸橋的直播課。
直播課問(wèn)題解答
1.?葉酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作幾平行？
根據(jù)2022版國(guó)標(biāo)最新要求，葉酸是2-3平行，維生素B12是3平行。
2.?標(biāo)準(zhǔn)系列管怎么混勻？
標(biāo)準(zhǔn)系列管各組成溶液添加完畢后，用渦旋振蕩器混勻。
3.?試管法有試劑盒嗎？
有試管即用型試劑盒，分別是葉酸(GVT1001)、維生素B12(GVT1002)、生物素(GVT1003)和泛酸(GVT1004)。
4.?容量瓶需要定期檢定嗎？
需要，GB/T 27405-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范?食品微生物檢測(cè)》標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定需要對(duì)定容設(shè)備定期檢查以確保其準(zhǔn)確度。
5.?有時(shí)強(qiáng)化食品生產(chǎn)企業(yè)會(huì)在標(biāo)注量上故意多添加一些，這種情況下該如何估算？
第一次做此類樣品只能預(yù)估含量，適當(dāng)多選幾個(gè)稀釋倍數(shù)。后續(xù)有經(jīng)驗(yàn)了，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)估含量。
6.?標(biāo)準(zhǔn)系列管最后高濃度的幾個(gè)點(diǎn)不穩(wěn)定有什么可能的原因？
原因較多，可以重點(diǎn)看標(biāo)品配制的準(zhǔn)確性和添加的準(zhǔn)確性，特別是移液槍的準(zhǔn)確度。
7.?請(qǐng)問(wèn)您用試管的多管法紫外分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線選幾次曲線？國(guó)標(biāo)里面沒(méi)有明確規(guī)定，也沒(méi)有對(duì)線性做明確要求。
國(guó)標(biāo)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式?jīng)]有明確要求，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部統(tǒng)一即可。我們一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合。
8.?國(guó)標(biāo)法葉酸培養(yǎng)基滅菌以多少毫升為宜？以前做過(guò)會(huì)發(fā)生褐變。
培養(yǎng)基用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品數(shù)量來(lái)定，一般滅菌后要及時(shí)從高壓鍋中取出，立刻降溫，避免過(guò)度加熱。
9.?按含量選擇稀釋倍數(shù)但是還是超標(biāo)曲，為什么呢？
一般是因?yàn)闃悠返膶?shí)際含量高于樣品標(biāo)簽值，建議按經(jīng)驗(yàn)含量值預(yù)估稀釋倍數(shù)。
10.?玻璃器具浸泡可以只用洗滌劑浸泡嗎，需要浸泡多久？
2022版國(guó)標(biāo)上明確寫可以用鹽酸或月桂基磺酸鈉洗滌劑浸泡，但未明確浸泡時(shí)間。2014版國(guó)標(biāo)上要求鹽酸浸泡2小時(shí)。我們目前還是浸泡2小時(shí)。
11.?鹽酸浸泡，鹽酸濃度有要求不？
國(guó)標(biāo)上試劑配制里有寫，例如葉酸在國(guó)標(biāo)3.2.5條款中要求“量取100mL鹽酸（濃度36%-38%）與50倍水混合”。
12.?培養(yǎng)基用什么盛裝滅菌？如何混勻？
用三角瓶就可以，滅菌前通過(guò)玻璃棒攪拌或浸泡方式充分溶解。
13.?曲線達(dá)到多少算合格呢？
國(guó)標(biāo)上沒(méi)有明確要求。我們自己一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合，R2值一般0.99常見，最低要求0.97。
14.?酶解法，如何進(jìn)行預(yù)估比較合理？
酶解法處理的是原生樣品，可查閱相關(guān)資料獲取含量范圍或通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)先摸索含量。
15.?標(biāo)準(zhǔn)曲線需要0.999嗎？
維生素實(shí)驗(yàn)3個(gè)9很難實(shí)現(xiàn)。我們自己一般用二次多項(xiàng)式曲線擬合，R2值一般0.99常見，最低要求0.97。
16.?維生素B12國(guó)標(biāo)方法計(jì)算公式能麻煩講解一下么？
維生素B12國(guó)標(biāo)計(jì)算公式中只有一個(gè)f，沒(méi)有像葉酸一樣寫明是V×f，所以維生素B12的f實(shí)際就是V和f的乘積結(jié)果。
17.?5mL不含葉酸的標(biāo)準(zhǔn)工作液是什么？
應(yīng)該是5mL不加葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液的無(wú)菌葉酸測(cè)定培養(yǎng)基，其實(shí)就是葉酸測(cè)定培養(yǎng)基。
18.?曲線為什么會(huì)飄點(diǎn)呢？
要結(jié)合具體數(shù)據(jù)才能分析，一般來(lái)說(shuō)與標(biāo)品配制的溶解和添加準(zhǔn)確性有關(guān)系。
19.?維生素B12過(guò)濾的樣品用都過(guò)濾完嗎？
不需要，只要過(guò)濾出需要的量就可以了。
20.?微孔法數(shù)據(jù)處理是我們蝴蝶軟件嗎？怎么用的呢？
Excel和蝴蝶軟件都可以，蝴蝶軟件用法不變，只有稀釋度那里需要根據(jù)實(shí)際稀釋倍數(shù)進(jìn)行調(diào)整換算。
21.?更新版的陸橋維生素B12培養(yǎng)基顏色方面有改進(jìn)嗎？
2022版國(guó)標(biāo)對(duì)培養(yǎng)基成分沒(méi)有調(diào)整，所以我們培養(yǎng)基配方不會(huì)改變，還是與國(guó)標(biāo)保持一致。
22.?葉酸計(jì)算公式C0?是接種空白嗎？一定要扣除零點(diǎn)嗎？國(guó)標(biāo)里的公式?jīng)]有明確標(biāo)注要扣零點(diǎn)。
C0?是酶解法公式中的參數(shù)，是酶空白測(cè)定的值。一般常用的直接提取法是不會(huì)用到這個(gè)參數(shù)的。
23.?萊士曼氏乳桿菌不太穩(wěn)定，有什么好的保存方法？
我們實(shí)驗(yàn)室菌株長(zhǎng)期保藏用-80度甘油法，一個(gè)月內(nèi)保藏放2-8℃冰箱，葉酸和生物素的菌株可以平板直接放入冰箱，維生素B12?的萊士曼乳桿菌需穿刺培養(yǎng)后，放入冰箱。
24.?同樣的培養(yǎng)基，同樣的菌株活化方法，維生素B12國(guó)標(biāo)法長(zhǎng)但微孔板不長(zhǎng)是什么原因呢？
微孔板法的培養(yǎng)體系是300μl，遠(yuǎn)小于試管法的10mL。所以對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的混勻程度，菌活力、濃度及菌的混勻程度，各級(jí)溶液的混勻，移液槍的準(zhǔn)確度都有更高的要求。建議從這些方面排查原因。
25.?新版維生素B12國(guó)標(biāo)方法的計(jì)算公式單位最后怎么換算成μg/100g？
公式中有換算系數(shù)，按公式計(jì)算后單位即為μg/100g。
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（回放截止到2022年11月27日）
