在歐洲藥典、美國藥典以及ISO相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中，木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂廣泛用于腸道致病菌的分離，其配方設(shè)計(jì)十分精妙，令人嘆為觀止。

XLD瓊脂配方的妙處，在于綜合運(yùn)用糖發(fā)酵、賴氨酸脫羧、產(chǎn)H₂S等生化反應(yīng)，再輔以各成分巧妙的配比，從而將沙門氏菌、志賀氏菌與非致病腸道菌區(qū)分開來。

從XLD的配方中可見（圖1），細(xì)菌可利用的碳源是木糖、乳糖和蔗糖，其中木糖的含量相對較低，僅為乳糖和蔗糖的一半。培養(yǎng)基中所用的酸堿指示劑是酚紅，其在酸性條件下顯黃色，在堿性條件下顯紅色。此外，XLD也用硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵銨來檢測H₂S，其原理是細(xì)菌在酸性條件下，將硫代硫酸鈉還原并產(chǎn)生H₂S，H₂S與檸檬酸鐵銨中的鐵離子形成黑色的硫化亞鐵沉淀。需要注意的是，當(dāng)酸度太高時(shí)，因硫化亞鐵分解，黑色沉淀的產(chǎn)生會減少。

一、腸道致病菌與非致病菌

志賀氏菌、沙門氏菌這些腸道致病菌，在XLD上顯現(xiàn)為透明的粉紅色至無色菌落。由于志賀氏菌不能發(fā)酵木糖、乳糖和蔗糖產(chǎn)酸，也不能使賴氨酸脫羧產(chǎn)堿，因此志賀氏菌在XLD上顯現(xiàn)為透明的粉紅色至無色菌落（圖2）。

雖然沙門氏菌大多不發(fā)酵乳糖和蔗糖，但可迅速發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，在XLD上最初顯現(xiàn)為黃色菌落。然而，沙門氏菌還具有賴氨酸脫羧酶，還可分解賴氨酸產(chǎn)堿。而且由于培養(yǎng)基中木糖的含量相對較低，分解賴氨酸的產(chǎn)堿量最終會超過發(fā)酵木糖的產(chǎn)酸量，因此沙門氏菌在XLD上最終也顯現(xiàn)為透明的粉紅色至無色菌落。

非致病腸道菌，在XLD上顯現(xiàn)為黃色菌落。絕大部分非致病腸道菌，既可發(fā)酵木糖，又能發(fā)酵乳糖和蔗糖，在XLD上顯現(xiàn)為黃色菌落。雖然其中的一些大腸埃希氏菌和克雷伯氏菌也具有賴氨酸脫羧酶，可分解賴氨酸產(chǎn)堿。但是培養(yǎng)基中乳糖和蔗糖的含量較高，糖發(fā)酵的產(chǎn)酸量超過了分解賴氨酸的產(chǎn)堿量，這些菌在XLD上因此表現(xiàn)為黃色菌落（圖3）。

需要指出的是，雙相亞利桑那菌（沙Ⅲb）除了發(fā)酵木糖，大多也能發(fā)酵乳糖，糖發(fā)酵的產(chǎn)酸量較大，所以在XLD上也顯現(xiàn)為黃色菌落。

二、沙門氏菌與志賀氏菌

大多數(shù)沙門氏菌可發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，并在酸性條件下還原硫代硫酸鈉產(chǎn)H₂S，H₂S與鐵離子形成黑色的硫化亞鐵沉淀。同時(shí)，沙門氏菌可分解賴氨酸產(chǎn)堿，并中和一部分糖發(fā)酵所產(chǎn)的酸，形成的低酸環(huán)境更有利于硫化亞鐵沉淀的產(chǎn)生，所以XLD上沙門氏菌透明的粉紅色至無色菌落，帶有黑色且有光澤中心（圖4）。

而志賀氏菌由于不產(chǎn)H₂S，在XLD上的菌落不具有黑色中心。需要提醒的是，甲型副傷寒以及一些豬霍亂沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌也不產(chǎn)H₂S，在XLD上的菌落也沒有黑色中心。

三、沙門氏菌與奇異變形桿菌

某些變形桿菌和檸檬酸桿菌也可還原硫代硫酸鈉產(chǎn)H₂S，特別值得一提的是奇異變形桿菌，該菌可發(fā)酵木糖和葡萄糖，但不發(fā)酵乳糖和蔗糖，而且還產(chǎn)H₂S，這些生化特性與沙門氏菌完全一致，所以其在XLD上的菌落形態(tài)與沙門氏菌很相似，此外，奇異變形桿菌在三糖鐵瓊脂上的反應(yīng)也與沙門氏菌一模一樣。因此，奇異變形桿菌常作為干擾菌，用于沙門氏菌檢驗(yàn)項(xiàng)目的能力驗(yàn)證和盲樣考核。

但是這些變形桿菌和檸檬酸桿菌由于沒有賴氨酸脫羧酶，不能分解賴氨酸產(chǎn)堿，因此不能中和糖發(fā)酵所產(chǎn)的酸。由于高酸水平會導(dǎo)致部分硫化亞鐵沉淀溶解，所以在XLD上菌落的中心呈現(xiàn)為灰黑色。XLD上變形桿菌和檸檬酸桿菌的菌落中心，沒有沙門氏菌的菌落中心辣么亮，也沒有辣么黑。

四、其他

為了排除革蘭氏陽性菌的干擾，XLD中還添加了脫氧膽酸鈉。值得注意的是，不同品牌XLD瓊脂配方中，脫氧膽酸鈉的含量、甚至是木糖的含量會略有不同，但這對沙門氏菌和志賀氏菌的分離并沒有實(shí)質(zhì)性影響。

另外，XLD瓊脂無需高壓滅菌，可通過煮沸消毒，但不宜過度加熱，以免影響其選擇性。制備好的XLD瓊脂，在防止干燥的情況下，可在冰箱冷藏不超過4周。

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主要參考文獻(xiàn)：
1、Difco & BBL Manual.Manual of Microbiological Culture Media[M].BD Diagnostics,USA, 2009.?
2、Taylor W I. Isolation of shigellae I Xylose lysine agars:?new media for isolation of enteric pathogens[J]. Am J Clin Pathol, 1965, 44(4):471-475.?