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真菌毒素檢測(cè)技術(shù)——嘔吐毒素篇

發(fā)布時(shí)間: 2019-08-29

真菌毒素檢測(cè)技術(shù)——嘔吐毒素篇


1、?? 嘔吐毒素(DON)簡(jiǎn)介

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,簡(jiǎn)寫(xiě)為:DON)是一種單端孢霉烯族化合物。它主要來(lái)源于鐮刀菌屬,其中禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌是主要的產(chǎn)毒菌種。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,與3-乙酰和15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,共同組成劇毒分子,被認(rèn)為是造成免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要因素。DON?毒素污染糧食的情況非常嚴(yán)重,許多糧谷類(lèi)都會(huì)受到DON毒素的污染,如小麥、玉米、燕麥和大麥。被DON毒素污染的小麥更易發(fā)生小麥赤霉病,谷物的活力以及農(nóng)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也很大程度降低,對(duì)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)造成嚴(yán)重的損失。由于DON?毒素性質(zhì)穩(wěn)定,一般的食品生產(chǎn)加工過(guò)程很難破壞其毒性,進(jìn)入食物鏈后對(duì)人和動(dòng)物的健康造成威脅。?DON?毒素具有很強(qiáng)細(xì)胞毒性,對(duì)生長(zhǎng)較快的細(xì)胞例如淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、骨髓造血細(xì)胞等均具有明顯的毒性作用。人食用了被DON?毒素污染的食品后,主要表現(xiàn)為惡心、腹瀉、嘔吐等癥狀。而動(dòng)物常有的癥狀為體重減輕、厭食。雖然它的毒性較同族其它真菌毒素小,但由于它廣泛存在并大量污染糧食,對(duì)人畜構(gòu)成很大危害。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織1973年聯(lián)合召開(kāi)的第三次食品添加劑和污染物會(huì)議上,單端孢霉烯族毒素被定為最危險(xiǎn)的自然發(fā)生食品污染物。列入國(guó)際研究的優(yōu)先地位。世界上絕大多數(shù)政府對(duì)人類(lèi)及動(dòng)物食物中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量制定了嚴(yán)格的限定。因此,準(zhǔn)確快捷地檢測(cè)出商品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇旳含量極其重要。

真菌毒素檢測(cè)技術(shù)——嘔吐毒素篇

圖1?嘔吐毒素結(jié)構(gòu)圖


2嘔吐毒素(DON)的限量標(biāo)準(zhǔn)? ??? 根據(jù)《食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)標(biāo)準(zhǔn): 規(guī)定谷物及其制品中的嘔吐毒素(DON)?的限量為1000μg /kg。


3、酶聯(lián)免疫法檢測(cè)嘔吐毒素(DON)???定量檢測(cè)原理基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。酶標(biāo)板微孔包被有DON特異性抗體,DON標(biāo)準(zhǔn)品或樣品以及DON-HRP酶結(jié)合物(檢測(cè)溶液)加入包被有抗體的微孔中。DON-HRP酶結(jié)合物與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的DON競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合DON抗體。未結(jié)合的DON-HRP酶結(jié)合物在洗滌步驟中洗去。加入底物溶液后,產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。加入終止液終止反應(yīng),藍(lán)色物質(zhì)變成黃色。450nm下測(cè)定吸光值,吸收光的強(qiáng)度與樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中DON的濃度成反比


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4、免疫金標(biāo)快速試紙條檢測(cè)嘔吐毒素DON? ? 定量側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)基于免疫層析測(cè)定原理。微孔中有耦合在膠體金上的DON特異性抗?體。在微孔中加入待測(cè)液,反復(fù)吹打形成懸浮混合液后開(kāi)始孵育。在孵育過(guò)程中,DON(若存在)與膠體金抗體結(jié)合,達(dá)到抑制檢測(cè)線顯色的效果。將試紙條插入混合液中,液體沿試紙條垂直向上層析并層析至檢測(cè)區(qū)(檢測(cè)區(qū)內(nèi)有控制線和檢測(cè)線)。測(cè)試有效時(shí),上方的控制線會(huì)顯色。檢測(cè)線的顏色深淺與樣品中DON濃度成反比。通過(guò)使用?S-Flow?軟件及對(duì)稱(chēng)定量技術(shù)可以準(zhǔn)確測(cè)定DON的濃度。


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