目前已頒布的維生素測定系列標準中都增加了微孔板法，此方法在制作標準系列管、試樣系列管，以及測定吸光度值時，簡化了試驗操作，相比之前傳統(tǒng)的“試管法”，節(jié)省了大量的準備工作。相信不少檢驗員心里都暗暗竊喜，認為從此就可以從“試管中”解放出來了，但事實真的如大家所想嗎？

也許未必！體系的縮小帶來的是更多精準的要求，任何微小因素的影響都有可能導致試驗失敗。為此，北京陸橋特別推出國標維生素微孔板法即用型產品，為您避開影響因素，保證試驗結果的準確性。下面就聽小編仔細盤點影響該實驗的幾個重要因素：

一、標準溶液的濃度配制不準確，導致失敗

01 天平精度不達要求，導致稱量不準確

標準品應采用高精度天平稱量。在葉酸、生物素和泛酸標準中，均規(guī)定使用精確至0.1mg（即0.0001g）的天平進行標準品的稱量；而維生素B12則更需使用精確至0.01mg（即0.00001g）的天平進行標準品的稱量，以此才能達到精確稱量的目的。

02 溶解和轉移操作中標準品的損失

很多實驗員在用容器溶解標準品并轉移到容量瓶的過程中，有溶解不充分、溢灑及轉移不完全的情況，這會導致標準品損失，標準溶液濃度降低。?

03容量瓶定容不準確

標準溶液配制過程中需多次定容，每次定容都需謹慎對待，一旦哪個步驟定容不準確，就會引發(fā)連鎖問題。定容后混勻不充分，容量瓶上下顛倒時發(fā)生漏液情況，或者從高濃度配置低濃度時，吸取量不準確，都會導致配制的標準溶液濃度不準確，進而導致測定結果偏高或偏低。

微孔板法即用型試劑盒中標準溶液配制VS傳統(tǒng)標準溶液配制

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了定量凍干標準品。其標準溶液和標準工作液的配置，只需使用試劑盒中的無菌水充分溶解標準品凍干試劑即可，十分簡便。因規(guī)避了上述國標方法中標準溶液配制過程中的諸多不準確因素，保證了標準溶液濃度的準確性。并且標準系列管每個標準點濃度均與國標要求的濃度一致，標準品同時提供來源說明，可以溯源，保證大家放心使用。

二、?菌株活性不穩(wěn)定，導致失敗

01菌株活化及保存不易

四項維生素試驗所需標準菌株（ATCC7469、ATCC7830、ATCC8014）均需嚴格按照菌株說明書進行復蘇活化。菌株活化之后，若想長期保存，最好采用超低溫冷凍保存法（需要有超低溫冰箱）進行保存，才能保證其活力。

02菌株使用不易

標準菌株活化及復蘇后，不能馬上進行試驗，至少需使用相應培養(yǎng)基連續(xù)傳種2-3代以上，才可以進行維生素檢測試驗。否則易出現標準系列管和試樣管不生長或生長不好的情況。

03菌株活力判斷不易

標準菌株在乳酸桿菌平板或乳酸桿菌肉湯中生長良好，肉眼看平板上菌落較大或肉湯中菌液渾濁，但并不等于該菌活力（對特定維生素利用敏感）良好。例如，經常有標準系列管吸光度值（即OD值）雖成梯度但整體數值較低的情況。而造成這種情況的原因就是該菌對特定維生素利用不夠敏感，需重新從儲備菌株復蘇并傳代，再次進行維生素測定試驗以驗證菌株的活力。

微孔板法即用型試劑盒中凍干菌球VS國標自制接種液

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了凍干定量菌球。該菌球真空包裝，菌濃度定量制備，且可以保證菌株的活力，直接加入培養(yǎng)基中即可使用。相比國標自制接種液，則需要活菌、保菌、提前制備種子液，洗菌、調菌濃度等繁瑣操作，在方便簡單的同時，極大的提高了試驗的成功率！同時，我司還提供了標準菌株的來源說明，可存檔溯源。

三、?培養(yǎng)基影響，導致失敗

維生素測定培養(yǎng)基制備時也有很多注意事項：

第一、要求從稱量勺到配制培養(yǎng)基用的三角瓶，都需經過鹽酸浸泡并至少200℃高溫處理2h，去除維生素殘留干擾，才可以使用，并且最好每個項目專用一套器材。堅決不可與實驗室日常檢測用器皿混用，避免混入待測維生素。

第二、培養(yǎng)基配制用水至少需達到二級水標準，才可以使用。

第三、高壓滅菌121℃，5min，滅菌后及時取出冷卻，避免褐變。

微孔板法即用型試劑盒中即用培養(yǎng)基VS滅菌培養(yǎng)基

國標微孔板法即用型試劑盒中，提供了即用型無菌液體培養(yǎng)基基礎和凍干添加劑。將培養(yǎng)基中敏感不穩(wěn)定成分進行凍干保存，可以進一步確保培養(yǎng)基的性能，使用前將添加劑溶解后與基礎培養(yǎng)基混勻，就可直接使用。一步操作，簡單方便。

四、?耗材干擾，導致失敗

在過去幾年的維生素實驗中，我們經常遇到菌生長不好、測定結果低、回收率低等情況，分析各種原因時猛然發(fā)現：原來一次性耗材也是影響成敗的一環(huán)。因為市售很多耗材含有影響測定菌株生長的物質，從而導致各種問題出現。此外，維生素微孔板法試驗所使用的微孔板必須滿足以下五點才能保證好的實驗結果：

1）無菌

2）無維生素污染

3）有無菌封口膜且膜能封住每一個孔，避免孔間不同梯度污染

4）孔深度要夠（因為反應體系需300uL）

5）透度要高（透度影響酶標儀讀數）

市面上滿足無菌條件的96孔微孔板比較常見，但同時滿足上述五點要求的不多，需要大家仔細甄別。推薦大家購買我公司精心挑選的微孔板，此微孔板不僅滿足上述5點要求，并且經我們試驗驗證微孔板材質不含抑菌成分，維生素測定結果比較穩(wěn)定。

陸橋牌維生素微孔板法試劑盒系列產品

以上是小編精心整理的關于維生素檢測實驗中的主要影響因素，也是相對比較難控制和把握的。北京陸橋提供的維生素微孔板法即用型試劑盒系列產品，在幫您避開容易導致試驗失敗因素的同時保障您快速獲得合格的檢測結果，讓維生素檢測變的簡單！