葡萄球菌屬是革蘭氏陽性球菌，因鏡檢時呈單個、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如串狀葡萄，故稱為葡萄球菌。葡萄球菌無鞭毛，不能運動。無芽胞，需氧或兼性厭氧，對營養(yǎng)要求不高。
致病性的葡萄球菌多數(shù)能產(chǎn)生血漿凝固酶，而非致病性菌株一般不產(chǎn)生，因此，血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)之一。
致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：
一種是結(jié)合凝固酶，存在于菌體細(xì)胞壁上，可直接作用于血漿中纖維蛋白原，使其凝集成塊，并附著于細(xì)菌表面，玻片法和試管法均可; 另一種稱為游離凝固酶，是在菌體內(nèi)生成后分泌至菌體外，被血漿中協(xié)同因子激活，形成葡萄球菌凝固酶類物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，導(dǎo)致血漿凝固，適用于試管法。
為方便理解，請看下表：
玻片法血漿凝固酶試驗應(yīng)用已久，醫(yī)院臨床實驗室多采用此方法，此方法優(yōu)點：快速、簡單、易于操作。缺點：出現(xiàn)假陽性，對血漿的濃度，敏感性，特異性要求較高。而試管法的優(yōu)點：結(jié)果穩(wěn)定，可檢測游離型凝固酶和結(jié)合型凝固酶?！禛B 4789-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)?食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》中也采用了試管法。
血漿凝固酶試驗所需的試劑藥品與菌株
1、實驗藥品：凍干血漿（CM304）、BHI肉湯（GCM917B/CM917B）、營養(yǎng)瓊脂（GCM107/CM107）、無菌水。
2、血漿凝固酶對照菌株：陽性菌株：金黃色葡萄球菌 ??陰性菌株：表皮葡萄球菌。
血漿凝固酶試驗操作流程中的注意事項
1、 將在Baird-Parker平板上或血平板上的可疑菌落同時接種在5ml的BHI肉湯與營養(yǎng)瓊脂，36℃±1℃，培養(yǎng)18-24h。?
培養(yǎng)完成后，先觀察BHI肉湯培養(yǎng)物的生長狀態(tài)。如果出現(xiàn)生長狀態(tài)不良，菌液濁度不夠，需要用營養(yǎng)瓊脂上的菌落重新接種BHI肉湯活化。
2、吸取0.5ml無菌水到CM304凍干血漿西林瓶中，搖勻使之溶解均勻，再加入上述新鮮BHI培養(yǎng)物0.2-0.3ml，混合均勻后放置36±1℃培養(yǎng)。?
加入新鮮的BHI培養(yǎng)物，“新鮮”應(yīng)理解為，培養(yǎng)物從培養(yǎng)箱取出后，立即進(jìn)行試驗。以保證培養(yǎng)物的酶活力良好。避免出現(xiàn)因取出一段時間后，因酶活力降低而引起的假陰性；加入培養(yǎng)物后要輕輕轉(zhuǎn)動瓶身至混合均勻，不要采取劇烈搖晃的方式。
3、每間隔0.5h觀察一次結(jié)果，直至6h結(jié)束，若出現(xiàn)凝固（凝固體積大于原體積一半）即待測菌血漿凝固酶為陽性，否則為陰性 。
試驗應(yīng)每半小時觀察一次，不可直接觀察第6h后的結(jié)果。一些金葡菌能夠產(chǎn)生蛋白酶來分解纖維蛋白，而出現(xiàn)先凝集而后消融的情況，保證每半小時觀察一次，防止因觀察不及時，而誤判成假陰性。觀察凝固情況時，采用將西林瓶緩慢傾斜或倒置的方式。不要采用搖晃的方式進(jìn)行觀察?。?！當(dāng)凝固體積大于原體積一半，判為陽性。
結(jié)果判定常見情況分析
當(dāng)遇到凝集現(xiàn)象不明顯，對結(jié)果的判定產(chǎn)生疑問時，可參照阿加西老師的《有關(guān)金葡菌不得不說的事》里提到的方法，進(jìn)行操作。先對試管的凝集程度進(jìn)行評分。再進(jìn)行判定。3+以上者判為陽性，1+、2+者，可將培養(yǎng)物重新培養(yǎng)后，再做一次血漿凝固酶實驗。或采用其它方法對可疑菌株進(jìn)行鑒定。
參考文獻(xiàn)
1、 GB 4789.10-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)?食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗
2、 阿加西.有關(guān)金葡菌不得不說的事
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