不同廠家RVS肉湯增菌效果的比較

發(fā)布時(shí)間： 2024-03-04

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GB4789.4-202*《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》征求意見稿和2023版《國(guó)家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》^[¹^]，最大的變動(dòng)之一是將SC更換為RVS。 RVS作為一個(gè)新的培養(yǎng)基被列入了食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)行列，但GB4789.28-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基與試劑的質(zhì)量要求》^[²^]及其征求意見稿中均未列入該培養(yǎng)基，如何對(duì)其進(jìn)行質(zhì)控？各廠家的RVS增菌效果是否相同？對(duì)此，我們做了相關(guān)驗(yàn)證。

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RVS肉湯的原理

培養(yǎng)基中大豆胨提供菌體細(xì)胞生長(zhǎng)所需的碳源、氮源等；氯鹽可以提高培養(yǎng)基體系的滲透壓，磷酸鹽作為緩沖體系維持培養(yǎng)基酸性環(huán)境（pH 5.2±0.2），孔雀綠可以抑制非沙門氏菌屬細(xì)菌的生長(zhǎng)。該培養(yǎng)基的選擇性表現(xiàn)在高滲透壓、低pH值以及孔雀綠的抑菌效果^[³^]。

不同廠家RVS肉湯增菌效果的比較

圖:3：RVS肉湯

RVS肉湯的質(zhì)控方法及比對(duì)結(jié)果

對(duì)比國(guó)內(nèi)外5個(gè)廠家（A?B C D E，其中A為陸橋）的RVS增菌液，按照GB 4789.28-2013 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》附錄D中SC增菌液的質(zhì)控方法，對(duì)RVS增菌液進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果無(wú)顯著性差異。

RVS肉湯的進(jìn)一步驗(yàn)證

各廠家RVS增菌液質(zhì)控結(jié)果無(wú)顯著性差異，是否在實(shí)際檢驗(yàn)中增菌效果就一致呢？樣品中通常含有大量的雜菌，我們模擬實(shí)際檢測(cè)將非目標(biāo)菌含量提高，參考質(zhì)控方法，選用不同血清型的沙門氏菌與大腸埃希氏菌ATCC25922混合。選擇低于標(biāo)準(zhǔn)要求的16h和標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)的20h，觀察增菌速度和增菌效果，開展了進(jìn)一步的驗(yàn)證試驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)方法：

不同血清型的沙門氏菌（接種量小于50CFU）與大腸埃希氏菌ATCC25922?(接種量為10⁶CFU)混合后接種RVS增菌液，于42℃±1℃培養(yǎng)，分別于16h和20h取增菌液，稀釋到適宜濃度后轉(zhuǎn)接到沙門氏菌顯色（SA）（陸橋二代）平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)，觀察目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)情況。在SA培養(yǎng)基上，目標(biāo)菌沙門氏菌呈紫紅色，大腸埃希氏菌為無(wú)色。

菌株信息：

結(jié)果：?

對(duì)于ATCC14028,CMCC(B)50976和CICC25045，廠家A和廠家D對(duì)目標(biāo)菌的增菌效果最優(yōu)，廠家A、D、E的抑制性最優(yōu)。（見附錄1?以ATCC14028為例）

對(duì)于ATCC29934,ATCC12325,CMCC50115和ATCC13076，廠家A對(duì)目標(biāo)菌增菌效果最優(yōu)，廠家A和D的抑制性最優(yōu)。（見附錄2?以ATCC12325為例）

結(jié)論：

由多個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出，綜合7株沙門氏菌的增菌效果和大腸埃希氏菌的抑制性，廠家A（陸橋）最佳。廠家A（陸橋）可較好的抑制非目標(biāo)菌--大腸埃希氏菌的生長(zhǎng)，有效避免了其對(duì)沙門氏菌產(chǎn)生的競(jìng)爭(zhēng)性抑制，同時(shí)能夠保證目標(biāo)菌沙門氏菌良好的促生長(zhǎng)能力。

? 廠家B和廠家C的表現(xiàn)基本一致，主要是抑制性較差，按照該實(shí)驗(yàn)方法，7次混菌實(shí)驗(yàn)都有大量非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)，這會(huì)增加日常檢測(cè)的工作量，且對(duì)于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種存在漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。

? 廠家D的表現(xiàn)與廠家A相似，但是對(duì)于腸沙門氏菌腸亞種鼠傷寒血清型CMCC(B)50115和腸道沙門氏菌亞種ATCC13076生長(zhǎng)較差，對(duì)于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種ATCC29934和ATCC12325的增菌速度慢且數(shù)量少，也存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

廠家E的主要問題是對(duì)大多數(shù)目標(biāo)菌的增菌能力較弱，有時(shí)會(huì)低其他廠家1個(gè)數(shù)量級(jí)。

附錄1：

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