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VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

發(fā)布時間： 2023-06-26

最近，檢測圈的一個傳聞引起檢測大神們的瘋狂討論—沙門氏菌在VRBA內(nèi)的菌落是紅色的！從原理上來說，這是不可能的！從傳聞來看，又像是真實(shí)存在的！為了破解這個謎題，我們做了相關(guān)的驗(yàn)證試驗(yàn)。

首先我們要了解一下VRBA培養(yǎng)基的成分及沙門氏菌的生化特性。




VRBA及沙門氏菌生化原理剖析




先來看VRBA培養(yǎng)基的組成成分（圖1）及原理：


VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

圖1? VRBA的組成成分


VRBA培養(yǎng)基中含有乳糖和中性紅。大腸菌群可發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，引起pH值的變化，中性紅作為酸堿指示劑使菌落變紅；酸與膽鹽結(jié)合形成膽酸鹽沉淀，故菌落周圍會有紅色的膽酸鹽沉淀環(huán)。

所以大腸菌群菌落變紅是由于發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸導(dǎo)致的！

了解了菌落變紅的原理，我們再來看一下沙門氏菌的生化特性：

VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

圖2? 三糖鐵試驗(yàn)結(jié)果


從三糖鐵的試驗(yàn)結(jié)果（圖2）看，沙門氏菌不能利用乳糖，只能利用葡萄糖，而VRBA 的成分中并沒有葡萄糖！從原理上分析，沙門氏菌在VRBA上不會形成紅色菌落。所以傳聞會是真的么？



試驗(yàn)驗(yàn)證




?首先，我們采用涂布法，在VRBA表面接種沙門氏菌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌在VRBA表面呈現(xiàn)大的無色菌落（圖3）。這符合沙門氏菌的特征，沙門氏菌一般不發(fā)酵乳糖，但在有氧條件下分解蛋白胨產(chǎn)堿，所以在VRBA表面形成大的無色菌落。


?燃鵝，我們繼續(xù)采用傾注法，在VRBA內(nèi)部接種沙門氏菌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌在VRBA內(nèi)部形成的小小菌落（圖4）竟然是紅色的！紅色的！！紅色的！！！


這是為什么捏？我們試驗(yàn)所用腸炎沙門氏菌不發(fā)酵乳糖啊？難道VRBA培養(yǎng)基中可能存在少量的沙門氏菌可利用的糖類，長在內(nèi)部的沙門氏菌利用該糖產(chǎn)酸，菌落周圍培養(yǎng)基pH值變化，使菌落呈現(xiàn)紅色?

? 為此我們做了原料的排查試驗(yàn)，采用去掉酵母浸粉成分的VRBA，以傾注法接種沙門氏菌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌在VRBA內(nèi)部形成小菌落是無色的了（圖5黃圈里的菌落）。

VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？


圖3? 腸炎沙門氏菌ATCC13076涂布接種

VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

圖4? 腸炎沙門氏菌ATCC13076傾注接種

VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？


圖5? 腸炎沙門氏菌ATCC13076傾注接種去掉酵母粉后的VRBA



酵母浸粉含糖是正常的么？




? ? ? 為此我們查閱了酵母提取物中所含的營養(yǎng)成分，有資料顯示，酵母提取物含有碳水化合物【1】，而碳水化合物主要來源于酵母菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜【2】，在酵母提取物生產(chǎn)的過程中，先經(jīng)過細(xì)胞酶解自溶【2】，細(xì)胞溶解后，碳水化合物就存在于酵母提取物中。英國食品標(biāo)準(zhǔn)局公布的酵母提取物（調(diào)味品類）的營養(yǎng)成分表中，每100g酵母提取物中含糖1.6g。推測酵母提取物本身就含有一定的糖類。由于酵母浸粉中本身就含有一定糖類，沙門氏菌利用其中的糖類產(chǎn)生酸，從而在VRBA內(nèi)形成了紅色小菌落。

? ? ??那么，其他品牌VRBA的酵母浸粉是否含糖類呢？為此我們又進(jìn)行了比對試驗(yàn)，用傾注接種ATCC14028鼠傷寒沙門氏菌。A-E代表不同品牌的培養(yǎng)基，其中A為陸橋，E為某進(jìn)口品牌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)沙門氏菌在A、C和E三個品牌VRBA內(nèi)部都會形成小小的紅色菌落，而在B和D品牌VRBA內(nèi)部卻形成了大的紅色菌落，有些菌落周圍還會有膽酸鹽沉淀（圖6，可點(diǎn)擊單圖放大查看），與大腸菌群典型菌落相似。
VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？
VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？
VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？
VRBA內(nèi)的紅色小菌落，有可能是沙門氏菌？

圖6? 各品牌的比對試驗(yàn)



? ? ??至此，所有的疑問都已解開。原來沙門氏菌真的會在VRBA內(nèi)部形成紅色菌落，但在大部分品牌VRBA上沙門氏菌菌落很小，與典型大腸菌群還是比較好區(qū)分的，且BGLB驗(yàn)證時很容易排除。




參考文獻(xiàn)

1、Difco&BBL Mannal: Second Edition【M】United States of America, 2009

2、張曉桐等，酵母提取物提取工藝及應(yīng)用的研究進(jìn)展【J】中國調(diào)味品，2019,002（044）：160-163

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